La Plataforma de Cultivos Celulares (PCC) se crea para cubrir las necesidades del personal investigador del Instituto de Investigación Sanitaria Biogipuzkoa, Centros de Investigación, Centros Tecnológicos y empresas externas en el ámbito de Gipuzkoa que trabajan en cultivos celulares para proporcionarles apoyo técnico y científico.
Desde la Plataforma se ofrecen servicios y asistencia técnica en el área de cultivos celulares, microscopía de fluorescencia, citometría de flujo y análisis del metabolismo celular (Sea Horse). A su vez, la Plataforma ofrece servicio de criopreservación.
El equipo de la Plataforma se encarga del correcto funcionamiento y mantenimiento preventivo de los aparatos de cultivos (cabinas, incubadores, etc.), control de la limpieza general de las salas, mantenimiento de la documentación adecuada y elaboración de protocolos de limpieza y mantenimiento con especial atención a la gestión de residuos, bioseguridad, control microbiológico y de micoplasma.
En el año 2021, con la adquisición de nuevas infraestructuras la Plataforma de Cultivos Celulares, se han conformado como dos nuevas Unidades:
- Unidad de Microscopía Confocal.
- Unidad de Citometría de Flujo.
La Plataforma de Cultivos Celulares del Instituto de Investigación Sanitaria Biogipuzkoa pertenece a la Red Española de Microscopía Óptica Avanzada (REMOA).
La plataforma gestiona sus procesos siguiendo las directrices de la Norma UNE-EN ISO 9001:2015 estando su Sistema de Gestión de Gestión de la Calidad certificado por AENOR, lo que supone un valor añadido a la labor desempeñada por la Plataforma, sobre todo de cara a los peticionarios externos de sus servicios, aportando confianza sobre el grado de Calidad que se aplica en el tratamiento de sus solicitudes.
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Desde la Plataforma de Cultivos Celulares se ofrece el acceso a sus infraestructuras, lo que implica tener conocimientos previos del aparato a emplear o, en caso contrario; recibir por parte del personal un curso específico para ello. Así mismo, la plataforma ofrece apoyo metodológico y científico en el diseño de proyectos y la realización de experimentos bajo presupuesto.
Los servicios e infraestructuras disponibles en la plataforma son los siguientes:
Sala de cultivos
La Plataforma de Cultivos Celulares consta de aproximadamente 75 m2 divididos en 3 salas de cultivo celular: dos de las salas están reservadas para el cultivo de células primarias y estables mientras que la tercera se emplea para la infección de células con virus.
Todas las sala de cultivos están equipadas con vacío y canalización de CO2 y N2 y cuentan con puestos de trabajo de dichos gases anexos a los incubadores para garantizar su seguridad.
Datos técnicos de las salas y aparataje de cultivos celulares
Los servicios prestados vinculados con las salas de cultivos son las siguientes:
- Obtención de diferentes tipos celulares: procesamiento de tejidos (piel, músculo, sangre, etc.) tanto de humano o de ratón con el objetivo de obtener células primarias (fibroblastos, mioblastos, diferentes tipos de células madre, etc.), solicitadas por el investigador.
- Cultivos de líneas estables o inmortalizadas: informar de la existencia comercial del tipo celular solicitado, su mantenimiento, amplificación y crioconservación.
- Mantenimiento de líneas celulares en cultivo bajo estrictas condiciones de esterilidad para asegurar la buena ejecución de los experimentos asociados.
- Ensayos de proliferación y viabilidad celular.
- Ensayos de transfección.
- Detección de contaminación por micoplasma.
- Servicios básicos de la plataforma: Formación y entrenamiento básico técnico en el manejo y experimentación en cultivos celulares y mantenimiento de stocks de líneas celulares en nitrógeno líquido.
Unidad de Microscopía Confocal
La Plataforma de Cultivos Celulares ofrece el acceso al microscopio confocal LSM 900 KMAT con AXIO OBSERVER 7 de Zeiss. Combina una buena calidad de imagen del LSM 900 confocal con un sistema de iluminación de fluorescencia Colibri LED con puntos de reflexión en 385nm, 475nm, 555nm y 631nm, cubriendo así un rango de fluorescencia desde DAPI hasta Cy5.
Además, la Plataforma dispone un microscopio de fluorescencia Axiovert 200M de Zeiss y otro microscopio de fluorescencia ECLIPSE 80i de Nikon, ambos con filtros para DAPI, FITC, Texas Red, Triple y Rojo lejano para la observación y análisis de muestras de naturaleza muy diversa (células, tejidos, etc.). Igualmente, se pueden observar muestras sin fluorescencia como hematoxilina-eosina, DAB (3,3´diaminobencidina), Jenner-Giemsa, etc.
La Plataforma dispone del sistema informático básico para el procesamiento y análisis de las imágenes digitales obtenidas.
La Plataforma de Cultivos Celulares ofrece el servicio de realización de inmunofluorescencias además de formación y asesoramiento a los usuarios en la utilización de los equipos y metodologías disponibles.
Unidad de Citometría de flujo
La Plataforma ofrece el acceso al Sorter SH800S de Sony que permite separar diferentes tamaños de células usando los distintos de chips de microfluídica de 70 μm, 100 μm y 130 μm.
Proporciona un alto nivel de automatización disponible para cualquier tamaño de célula, lo que permite la configuración, alineación, calibración y monitorización por parte del investigador con solo presionar un botón.
El software del sistema es intuitivo y admite la clasificación en tubos y placas de 96 y 384 pocillos. El software genera archivos FCS 3.0 y FCS 3.1 que pueden exportarse a herramientas de análisis de terceros.
Además, la plataforma ofrece el acceso al citómetro de flujo Guaca Easycyte 8HT, con un láser azul (488 nm) y un láser rojo (640 nm) posibilitando observar hasta 6 colores fluorescentes y 2 dispersión de la luz (light scatter). Además permite procesar muestras en una sola placa de 96 pocillos.
Igualmente la plataforma brinda la opción de asesorar a los usuarios sobre los principios y las aplicaciones de la citometría de flujo analítica básicas.
Seahorse
La Plataforma de Cultivos Celulares consta del nuevo aparato Seahorse XFe96 Analyzer y permite a los usuarios analizar el metabolismo celular de diferentes formas:
- Función mitocondrial: respiración basal, turnover de ATP, proton “leak”… cuantificar así la bioenergía celular, identificar funciones mitocondriales y medir la respuesta celular al stress.
- Función glicolítica: mide parámetros como la glicólisis, la capacidad glicolítica y la reserva glicolítica.
- Oxidación de los ácidos grasos.
Para más información:
http://www.agilent.com/en-us/promotions/xftechnologyoverview
Sala de nitrógeno líquido
Cuenta con dos depósitos de nitrógeno líquido situados en la sala de criogenia que están conectados a un sistema central de alarmas. A su vez, en esa misma sala existe una alarma de detección de oxígeno.
La Plataforma ofrece mantenimiento de crioviales en nitrógeno líquido.
